Cultivo de las células estromales de la médula ósea en un medio suplementado con los nutrientes N2: implicaciones sobre la generación de células neurales
Introducción La mayoría de los sistemas de cultivo para el mantenimiento in vitro y la diferenciación neural de las células estromales de la médula ósea (CEM) utilizan medios sintéticos suplementados con suero fetal bovino (SFB) al 10 o al 20%. Sin embargo, el suero se compone de cantidades desconocidas de sustancias no definidas que podrían interferir el efecto de las sustancias exógenas sobre la diferenciación neural de estas células.
Objetivo En este trabajo describimos la supervivencia de las CEM en condiciones de cultivo donde se redujo la concentración del SFB al 0,5 y al 1% y se utilizó la fórmula N2 de Bottenstein y Sato (1979) y un sustrato tratado con poli-L-lisina (PLL).
Materiales y métodos Se cultivaron células estromales aisladas de los fémures de rata en el medio de Eagle modificado por Dulbecco, con concentraciones de SFB del 10, el 1 y el 0,5% o en medio libre de suero, que contenían la fórmula N2. En los cultivos crecidos en medios libres de suero o con baja concentración de éste, la superficie de cultivo se trató con PLL. La supervivencia celular se midió por el método del MTT o por recuento de las células vivas.
Resultados La supervivencia de las CEM cultivadas en la fórmula N2 disminuyó hasta aproximadamente el 40% de la observada en el medio con SFB al 10%, y se afectó la morfología celular. Un aumento significativo de la supervivencia con respecto al cultivo en N2 se produjo cuando, además de este nutriente, se añadió SFB al 0,5 y al 1%. En los cultivos sembrados sobre superficies tratadas con PLL la supervivencia celular aumentó en comparación con los sembrados sobre superficies no tratadas.
Conclusiones Este sistema de cultivo que combina la fórmula N2 con SFB al 1% y emplea un sustrato tratado con PLL, es adecuado para el mantenimiento de las CEM. Estas condiciones son ventajosas para estudiar la diferenciación neural de estas células, ya que reducen la interferencia del suero. Se discute la posible implicación de este sistema de cultivo para los estudios de diferenciación neural en estas células.
Palabras claveCélulas estromales de la médula óseaCultivo de célulasSuero fetal bovinoSupervivenciaSuplemento N2
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